Biotin-PEG-NH₂（Biotin-PEG-Amine，α-生物素-ω-氨基聚乙二醇）是氨基化 PEG 双功能线中的"亲和捕获+胺端偶联"桥接分子：Biotin 端走 Streptavidin 系统，PEG 作亲水间隔，–NH₂ 端走 EDC/NHS 酰胺化、醛酮还原胺化、异硫氰酸酯硫脲化。

Biotin-PEG-Amine质量信息

中文名称：生物素-聚乙二醇-氨基 / 生物素-PEG-胺 / 生物素-聚乙二醇-伯胺 / 生物素-PEGₙ-NH₂（n=2/4/8/12等）

‌英文名称：Biotin-PEG-Amine / Biotin-PEG-NH₂ / Biotinyl-PEG-Amine / (+)-Biotin-PEG-Amine / d-Biotin-PEG-NH₂

‌别称：Biotin-PEG₂-NH₂；Biotin-PEG₄-NH₂；Biotin-PEG₆-NH₂；Biotin-PEG₈-NH₂；Biotin-PEG₁₂-NH₂；Biotin-PEG₂₄-NH₂；Biotin-PEG₃₂-NH₂；Biotin-PEG₁₀₀₀-NH₂；Biotinyl-PEG-Amine；Biotin-PEG-primary amine；Biotin-PEG-NH₂

‌储存条件：‌-20°C以下‌，‌干燥、避光、密封、惰性气体（N₂/Ar）‌保存

‌保质期：12个月

‌稳定性：① ‌PEG链化学惰性‌，在常规条件下极为稳定（耐酸、耐碱、耐酶、抗氧化）；② ‌生物素环‌在极端pH（＜2或＞12）和强氧化条件下缓慢降解，正常条件稳定；③ ‌伯胺端（-NH₂）‌在空气中缓慢氧化/碳化（黄变），盐酸盐/TFA盐大幅提高稳定性；④ ‌长期光照‌对生物素环有轻微影响，避光保存；⑤ ‌冻干品‌比溶液更稳定；⑥ ‌水溶液中‌建议新鲜配制或-20°C分装保存，避免反复冻融；⑦ 水分含量＜0.5%为佳，吸潮后PEG链可能聚集影响溶解性；⑧ 高温（＞40°C）加速降解；⑨ 与NHS酯/醛基/异硫氰酸酯反应后产物稳定性取决于偶联物本身

Biotin-PEG-Amine纯化路线（按 PEG 链长分两轨）

轨道 A：短链/小分子 PEG 版（PEG3/PEG5/PEG7/PEG11，MW<1k）

粗品：Biotin 羧基 EDC/NHS 活化 + H₂N-PEGn-NH₂（或单胺 PEG）酰胺偶联，或 Boc-NH-PEGn-NHS 与 Biotin-NH₂ 偶联后脱 Boc；

一级纯化：反相制备 HPLC（C18，水/乙腈+0.1% TFA 梯度）切主峰，除 Biotin-NHS、游离 Biotin、TFA 盐杂；

二级纯化：硅胶柱层析（CHCl₃/MeOH 梯度）兜底去非极性副产物；

收尾：旋蒸除乙腈 → 冻干得白色蜡状/粉末，短链版（如 PEG3-NH₂），纯度 >95%。

轨道 B：高分子 PEG 版（1k/2k/3.4k/5k/10k/20k）

一级脱盐：透析（MWCO 按 PEG 选 500–3500 Da，如 PEG3.4k 用 3.5k 袋） 对水/稀醋酸钠换液，除去 EDC 脲衍生物、NHS、游离 Biotin；

二级精制：Sephadex LH-20 / GPC 凝胶过滤 按流体力学体积分峰，切主峰除 HO-PEG-NH₂ 与 Biotin-PEG-OH 单端杂；

备选：大批量用 制备型 GPC（TSKgel 或 Superdex 30）代替透析，批间 PDI 更稳；

终处理：0.1 μm 滤膜除微粒 → 冻干（预冻 -80 ℃，一次干燥 -20 ℃ 真空，二次干燥 4 ℃ 兜底） → 铝箔袋 + 干燥剂 + 氮气封装。

Biotin-PEG-Amine质控指标体系

Biotin-PEG-Amine批间一致性控制点

PEG 原料准入：单分散短链 PEG与窄分布 mPEG-NH₂（PDI<1.05）双源核验，进料先 GPC 卡 PDI，超 1.05 不投料；

Biotin 活化摩尔比：Biotin:NHS:EDC = 1:1.2:1.1，PEG-胺略过量，抑双胺端偶联成 Biotin-PEG-Biotin；

胺端保护策略：高分子版多直接用 H₂N-PEG-OH 与 Biotin-NHS 偶联（无需 Boc），短链版常用 Boc-NH-PEGn-NHS 偶联后 TFA 脱保，脱保完必须碱化转自由胺再纯化，否则 COA 上 NH₂ 取代率虚低；

冻干保护：不加海藻糖（避免胺端糖苷副反应），靠低浓度 TFA 铵盐洗脱后转醋酸盐/甲酸盐再冻干，保证胺端以自由碱或弱酸盐存在；

分装环境：露点 <-40 ℃ 手套箱或干燥间，铝箔瓶 + 分子筛 + N₂ 冲洗，标签印"取用前室温干燥器回温"。

Biotin-PEG-Amine"再质控"建议

投料前 NMR 快检：DMSO-d₆ 溶，看 δ 2.7–3.0 是否有 –NH₃⁺ 宽峰异常增宽、δ 3.5–3.8 PEG 主峰是否干净；

TNBS 测自由胺：570 nm 比色，算实际 –NH₂ 当量，按"实测胺摩尔"投 EDC 偶联，别按标称 MW 算；

HABA 测 Biotin 活性：A₃₅₇ 位移法确证亲和端未被胺化副反应封闭；

忌直接水溶涡旋：高分子版先 DMSO 助溶再稀释 PBS，防胺端成胶体分散误判"不纯"。

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